色谱柱目前主要用于生物化学、药物和临床分析,具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度好等特点。色谱柱到目前为止,已经形成了各种特殊的色谱柱,如制备柱、分析柱和各种微柱,但色谱柱的主体仍然由柱、柱填料和两端的接头组成。不知道大家有没有这样的经历,就是色谱柱使用一段时间后,会出现柱压升高、柱效降低、峰值畸变和分离度降低、保留时间变化等变化。如果不采取措施,色谱柱的使用寿命会缩短,影响工作效率,造成一定的经济损失。
色谱柱的使用方法
安装保护柱:保护柱是消耗品,经过一定数量的样品分析(50~100次)之后,当柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
过滤流相和样品:流相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成。原则上,所有色谱柱的流相都应过滤,但在实际操作中应根据具体情况而有所不同。
净化样品:样品含有损坏色谱柱的化学成分,如蛋白质、糖等有机分子和强吸附物质,以及可能损坏柱填料的基团离子。样品应尽可能分离和净化,以去除多余的杂质成分。
避免过高的柱压:避免的方法是(1)柱压过高时,尽量采用较小的流速,不得超过柱最大允许压力的一半。(2)当流速较大时,应采用流速梯度的方法将流速分步到位。(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换应尽可能快。
色谱柱使用注意事项
1.避免压力和温度的急剧变化和任何机械振动。温度的突然变化或色谱柱从高处脱落会影响柱内的填充状态;柱压的突然升高或降低也会影响冲动柱内的填料。因此,在调整流速时应缓慢进行,阀门进样时不应旋转过慢。
2.溶剂的组成应逐渐改变,特别是在反相色谱中,不应直接从有机溶剂改为全水,反之亦然。
3.一般来说,色谱柱不能反冲。只有当生产者指出柱可以反冲时,才能反冲去除柱头留下的杂质。否则,反冲会迅速降低柱效。
4.选择使用合适的流动相(尤其是pH),为了避免损坏固定相。有时预柱可以连接到进样器前面。当分析柱关闭硅胶时,预柱为硅胶,在进入分析柱之前可以“饱和”流动相,以避免分析柱中的硅胶基质溶解。
色谱柱保存方法
不使用色谱柱时,将柱二端包裹起来,放入箱内室温避光保存。毛细管柱可用废垫切成两块,分别插入毛细管二段。用小塑料袋盖住填充柱,然后用细金属丝扎起来。因为分析室里有很多化学试剂,特别是在橱柜里会有一些气味,所以色谱柱可以更好地保存。放置时也要有序放置,毛细管柱要装在盒子里,以免压碎,放置时要记录在柱子和记录本上。拆下后,两端用橡胶垫密封,带有橡胶垫原色谱盒。如果没有,可以用进样垫制作,然后安装在原色谱盒中,注明相应的信息。一般要求放在干燥的地方,下次使用时,记得进样端和出口端不能反转。